Харьковский Аграрный Консультационный Центр

ПРОЕКТ

организации сертификатной лаборатории
для исследований племенной продукции
 (2000 – 2002 гг.)

Авторы проекта:

Григорьев Дмитрий Юрьевич, кандидат с./х наук

Щегельская Елена Анатольевна, кандидат с./х наук

Шеховцова Елена Юрьевна

Основные задачи ПРОЕКТА:

1. Проведение независимых сертификатных анализов продукции сельского хозяйства.

2. Выявление вирусных и бактериальных заболеваний у сельскохозяйственных животных

3. Генотипирование животных с помощью полимеразной цепной реакции.

Срок реализации проекта: 3 года.

ОБОСНОВАНИЕ

Независимая экспертиза сырья растительного и животного происхождения, продуктов их переработки, племенных животных, спермо- продукции и посевного материала является важным фактором защиты от недоброкачественной и опасной для здоровья человека и животных продукции.

В настоящее время создана достаточная база в Харьковском зооветеринарном институте для проведения сертификационного анализа зерна продовольственных культур, фуража, мясопродуктов.

Нами ставиться задача - внедрить в широкую производственную практику современные эффективные методы сертификации племенного материала в животноводстве. На протяжении 1998-1999 года сотрудниками нашего института был изучен опыт организации роботы сертификатной лаборатории "LABOGENA" (Франция ). Особое внимание было обращено на использование нового инструмента исследований генетического материала - полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Полимеразная цепная реакция, открытая в 1985 году Кэри Мюллис, является величайшим открытием современной молекулярной генетики, позволяющим специфически амплифицировать любой известный ген. Для этого необходимо минимальное количество ДНК вируса, бактерии, животного или растения, пара олигонуклеотидов (праймеров), ограничивающая искомый ген, термостабильная ДНК-полимераза – фермент, участвующий в синтезе двухцепочечной ДНК и набор из четырех нуклеотидов для формирования новой цепочки ДНК. Выявляют амплифицированный ген путем электрофореза в агарозном геле. Наличие в геле полоски ДНК соответствующего размера свидетельствует о наличии в образце искомого гена.

Этот метод позволяет быстро, в течение суток (что важно при завозе племенного материала извне), и точно с высокой специфичностью выявлять такие заболевания крупного рогатого скота, как ринотрахеит, хламидиоз, лептоспироз, лейкоз и другие. Для выявления вирусов, бактерий или простейших, вызывающих заболевание, достаточно нескольких капель крови, спермы, молока, мочи или кусочек ткани животного. Метод является очень чувствительным и позволяет выявить 2-5 патогенов в образце. При диагностике таких заболеваний как лептоспироз и туберкулез исключается длительное культивирование патогенов на питательных средах. Преимуществом этого метода является также возможность диагностики заболевания на ранних стадиях развития, в инкубационном периоде и при течении в скрытой, нетипичной форме.

В Украине ДНК - диагностика уже находит широкое применение в медицине при выявлении вирусных и бактериальных заболеваний человека, однако в ветеринарии она еще мало используется, несмотря на то, что угрожающее состояние заболеваемости сельскохозяйственных животных требует применения методов быстрого и точного выявления патогенов.

Целью данного проекта является внедрение ДНК – диагностики в животноводство с целью ускоренного создания здорового поголовья скота. Исполнителем является Сертификатная лаборатория при Харьковском зооветеринарном институте.

Проект включает использование известных и разработку новых методов ПЦР диагностики таких заболеваний животных, как сальмонеллез, лептоспироз, (раняя диагностика - менее 30 дней ), хламидиоз, токсоплазмоз , балантидиоз, ринотрахеит, лейкоз, листериоз, болезнь Ауэски, бруцеллез, колибактериоз, инфекционный гепатит, парвовирусный энтерит, панлейкопения, гемобартонеллез, Алеутская болезнь норок, рожа свиней и человека, и другие опасные заболевания человека и животных.

В Харьковском зооветеринарном институте имеются специалисты, прошедшие стажировку за рубежом и владеющие методами ДНК-диагностики. Изучен спрос на необходимость оценки заболеваемости скота. Проведены предварительные исследования спермы быков-призводителей на зараженность хламидиозом. Результаты показали, что ПЦР-анализ позволяет в течение суток выявлять хламидии в 30 образцах спермы. Себестоимость одного анализа без учета оборудования и зарплаты сотрудников составляет 3 у.е.

Установлены связи с отечественными и иностранными фирмами- производителями оборудования для ПЦР – диагностики. В Институте имеются специальные лабораторные помещения, предназначенные для проведения соответствующих исследований.

Биоаналитическая лаборатория имеет опыт сотрудничества в области молекулярной биологии и генетики с Национальным Институтом агрономических исследований (INRA) Франции и лабораторией генетического анализа животных LABOGENA, в которых интенсивно проводятся исследования по генетической диагностике. Заключен договор о сотрудничестве с Ветеринарным колледжем в Лионе. Опыт свидетельствует, что ДНК – диагностика широко и успешно применяется во Франции для выявления инфекционных заболеваний у сельскохозяйственных и домашних животных. В Украине использование современных методов молекулярной диагностики пока сильно запаздывает из-за несовершенства ветеринарного законодательства, отсутствия новых требований к сертификации животных, спермы, эмбрионов, наличие которых обезопасило бы потребителя от покупки заведомо инфицированного материала.

Задачи проекта и пути их решения

Задачи:

1. Организовать проведение независимых сертификатных анализов продукции сельского хозяйства.
2. Оздоровить племенное и товарное поголовье с.-х. животных от вирусных и бактериальных заболеваний.
3. В племенном животноводстве способствовать элиминированию животных, несущих гены, сцепленные с заболеваниями.

Пути решения поставленных задач:

1. Применение методов ПЦР-диагностики для выявления вирусной и бактериальной контаминации спермы быков производителей.
2. Внедрение простых и точных методов ДНК-диагностики для выявления инфекционных заболеваний у животных (в том числе на ранних стадиях и в скрытом периоде).
3. Подготовка пакета предложений по совершенствованию требований к сертификации сельскохозяйственных животных.

КАЛЬКУЛЯЦИЯ

Для выполнения проекта необходимо 30 тыс. грн в год.

Для создания лаборатории ПЦР-диагностики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных необходимо следующее оборудование:

Кроме вышеупомянутого оборудования необходимы реактивы для выделения ДНК и постановки реакции амплификации. В среднем для анализа 100 проб необходимо 200 у.е.

Командировочные в хозяйства для взятия проб зависят от удаленности хозяйств от Лаборатории. Заработная плата 5 сотрудников Лаборатории – 1000 грн. в месяц. Таким образом, для того, чтобы начать проведение анализов по ПЦР – диагностике инфекционных заболеваний у сельскохозяйственных животных необходимо как минимум 7000 – 8000 у.е.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате осуществления проекта животноводство Украины получит новую современную технологию диагностики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, которая поможет племхозяйствам создавать стада здоровых животных и, следовательно, поставлять на рынок экологически чистые продукты животноводства.